Медицина и здоровье

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАМЕЧАНИЯ.

КОЛЕБАНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Контроль за качеством радиоиммунологических систем, равно как и моделями для биологического определения гормонов in vivo и in vitro, настоятельно необходим. Для того чтобы результаты ис­следования имели силу, следует убедиться в параллельности кри­вых доза—реакция для препарата сравнения и неизвестной пробы. Как правило, каждая радиоиммунологическая и биологическая (in vitro) система для анализа требует исследований параллельных проб плазмы или гормона, что позволяет оценить колебания ре­зультатов как для данной системы, так и между системами. Кон­троль за качеством систем дает возможность определить стабиль­ность и воспроизводимость результатов. Вариационные коэффици­енты в пределах каждой системы обычно в 2 раза меньше, чем между системами. В связи с этим если ожидаются относительно небольшие, хотя и существенные, различия между пробами, лучше всего анализировать их с помощью одной системы (набора).

СТАБИЛЬНОСТЬ ГОРМОНОВ

После высвобождения из железы некоторые гормоны быстро рас­падаются и циркулируют в крови в виде фрагментов. Лучше всего это видно, вероятно, на примере ПТГ, который вскоре после выде­ления в кровь распадается на аминоконцевой и карбоксильно-концевой фрагменты. Последний фрагмент имеет гораздо более дли­тельный период полужизни в крови, чем аминоконцевой. Однако биологической гормональной активностью обладает именно амино­концевой фрагмент. При выработке антител к нативному ПТГ у иммунизированного животного могут появиться антитела к амино­концевому, карбоксильно-концевому или обоим фрагментам моле­кулы. Нормальные колебания концентрации ПТГ различаются в зависимости от специфичности антител, используемых для его определения. Другие гормоны, такие, как глюкагон и АКТГ, быст­ро разрушаются в плазме под действием содержащихся в ней про­теаз. Для того чтобы избежать этого, необходима специаль­ная обработка проб. Как правило, при получении их в пробирки добавляют ингибиторы протеаз, такие, как трасилол или бензамидин.

Другая методическая проблема возникает в том случае, когда гормоны секретируются в разных формах. Существуют, например, различные формы гастрина — «минигастрин», «малый гастрин», «большой гастрин» и «очень большой гастрин». С помощью боль­шинства методов определения гастрина при непосредственном ана­лизе проб не удается различить эти формы. В результате пробы предварительно следует подвергнуть гель-фильтрации, чтобы убе­диться в присутствии разных физических форм гормона. Это отно­сится и к другим гормонам, таким, как пролактин, инсулин и АКТГ. Более крупные формы обычно являются предшественника­ми меньших биологически активных нативных молекул.

Поскольку концентрация гормонов в сыворотке может изме­няться в зависимости от времени суток, позы больного, метабо­лического состояния и собственного ритма с периодичностью от нескольких минут до нескольких недель, отбор проб необходимо производить в одинаковых условиях. О нормальных колебаниях уровня данного гормона судят обычно на основании анализа проб, собранных в стандартных условиях. Должно быть совершенно ясным, что концентрация гормона, найденная с помощью макси­мально надежной аналитической системы, не будет иметь смысла, если анализируемые пробы получены в несоответствующее время или при несоответствующем метаболическом состоянии больного. Последнее может иметь важное значение особенно при определе­нии концентрации в крови ренина, альдостерона, СТГ, инсулина или глюкагона. Физическая активность, равно как и стресс, могут значительно изменять исходный уровень в крови пролактина, АКТГ, кортизола, ренина, альдостерона или СТГ. Наконец, син­тез и секреция гормонов могут изменяться под влиянием разнооб­разных лекарственных средств. Такие вещества, как резерпин, альдомет и фенотиазины, повышают содержание пролактина в кро­ви и, больше того, могут вызывать клинически значимую галакто­рею. Диуретики обычно увеличивают исходное содержание ренина в крови. В связи с этим важно предусматривать не только конт­роль за качеством системы определения, но и за условиями, в кото­рых отбирают биологические пробы. Без оптимизации того и дру­гого результаты определений окажутся бессмысленными.