ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эти методы представляют собой варианты описанных биологических исследований in vitro. Они обычно обладают большей чувствительностью, чем радиоиммунологические методы, но значительно более громоздки и дороги при расчете на одно определение. Результаты цитохимических биологических исследований количественно оценивают на гистологических срезах с помощью специального устройства — микроденситометра. Гистологические срезы готовят из специфических для данного гормона тканей или клеток-мишеней, до того подвергшихся воздействию разных концентраций стандартного и испытуемого гормона. С помощью денситометра сканируют область диаметром 250—300 нм для количественной оценки цветной реакции, обусловленной изменением редокс-состояния объекта под влиянием гормональной стимуляции. Для количественного анализа используют гистологические красители, чувствительные к этим изменениям.
Первая система цитохимического биологического исследования была разработана для АКТГ, и тканью-мишенью в этой системе служила кора надпочечников [8]. Другие способы биологического определения АКТГ либо слишком малочувствительны, либо требуют больших объемов плазмы. Таким образом, цитохимическое определение редокс-состояния ткани является ценным средством анализа нормальной и измененной функции системы гипоталамус—гипофиз—надпочечники по уровню АКТГ. Разработан цитохимический метод определения и Л Г, но при этом встретились существенные трудности, связанные со значительными колебаниями результатов разных определений и непостоянной чувствительностью объекта, что, возможно, отражает известные биологические расхождения у разных животных [9]. Чувствительные специфические цитохимические методы предложены для определения паратгормона, АД Г и тиротропина [10, 11]. При дальнейшем усложнении оборудования, которое позволит увеличить число исследований в одном определении, этот метод может найти более широкое применение. Он особенно привлекателен потому, что не требует использования радиоактивных соединений. Цитохимические методы нешироко применяются в клинике и используются в основном в качестве чувствительного способа в научных исследованиях.
Таблица 5—1. Биологические методы определения гормонов in vivo и in vitro
|
Гормон |
Метод |
Показатель |
Ссылка |
|
АКТГ |
In vivo (гипофизэктомированные крысы) |
Снижение уровня аскорбиновой кислоты в надпочечниках |
[12] |
|
АДГ |
In vivo (голодные крысы с водной нагрузкой) |
Снижение скорости мочевыделения или увеличение удельной массы мочи |
[13-16] |
|
Холецистокинин |
In vitro (полоски желчного пузыря кролика) |
Сокращение полосок |
[17] |
|
ФСГ |
In vivo (неполовозрелые самки крыс) |
Увеличение массы яичников |
[18] |
|
СТГ |
In vivo (гипофизэктомированные крысы) |
Ширина некальнифицированного эпифизарного хряща большеберцовой кости |
[19j |
|
ЛГ/ХГЧ |
In vivo (21-дневные гипофизэктомированные крысы) |
Увеличение массы вентральной части предстательной железы |
[1,2] |
|
ЛГ/ХГЧ |
In vitro (изолированные клетки Лейдига) |
Увеличение синтеза и секреции тестостерона в культуральную среду |
[6] |
|
Паратгормон |
In vitro (корковый слой почек крыс) |
Образование цАМФ |
[20] |
|
Пролактин |
In vitro (эксплантаты молочной железы мыши) |
Активность лактозаминсинтетазы или синтез фосфопротеина |
[21] |
|
Ренин |
In vitro (активность ренина) |
Образование ангиотензина I из субстрата ренина |
[22] |
|
Соматомедин |
In vitro (тазовые рудименты 11-дневных куриных эмбрионов) |
Включения 35S-сульфата |
[24] |
|
ТТГ |
1. In vivo (интактные мыши, получившие предварительно 131I и тироксин) |
1. Высвобождение 131I из щитовидной железы в кровь |
[25] |
|
2. In vitro (цитохимический, сегменты щитовидной железы морской свинки) |
2. Активность лизосомной нафтиламидазы |
[11] |
В табл. 5—1 перечислены различные биологические методы in vivo и in vitro, применяемые для определения полипептидных гормонов. Для многих гормонов специфические чувствительные методы биологического определения не разработаны.