MACT (множественный аллергосорбентный тест)
MACT (множественный аллергосорбентный тест) — метод определения аллергенспецифических IgE, аналогичный по принципу постановки РАСТ, где аллерген сорбирован на целлюлозных нитях, а в качестве индикатора реакции используются фотореагенты, свечение которых регистрируется на пленке Polaroid, на люминометре, на фотометре
(рис. 8). Метод позволяет быстрее получить результаты исследования,
дает возможность определять необходимые параметры даже у одного больного, не ожидая накопления проб для использования целого набора.
Рис. 8. Устройство для постановки МАСТ:
1 — MAST-панель в сборе; 2 — крышка; 3 — целлюлозные нити с адсорбированным аллергеном; 4 — корпус
Псевдоиммуноблот — метод, позволяющий одновременно выявлять специфические IgE-антитела к спектру аллергенов (к каждому из них)
в сыворотке или другом материале. Псевдоиммуноблот основан на твердофазном ИФА, но в отличие от последнего обладает большей специфичностью (но меньшей чувствительностью), быстротой выполнения, минимальным объемом крови (менее 0,5 мл), возможностью одновременного тестирования с большим числом аллергенов (около 20 в каждой панели). Кроме того, сейчас применяется программная высокоточная обработка результатов.
Современные тест-системы построены по принципу двухуровневого определения аллергостатуса: на первом уровне производится стандартное аллергообследование, позволяющее определить группу аллергенов,
к которой имеется чувствительность. После этого возможно проведение расширенного (более точного и сложного) определения чувствительности к конкретному аллергену.
Классический иммуноблот применяют в случае наличия четких указаний на причинный аллерген (данные анамнеза, элиминационного теста и др.) и отрицательных результатов тестирования на специфический IgE с охарактеризованными компонентами этого аллергена. В таких случаях из грубого экстракта аллергена получают блоты и проводят анализ сыворотки больного на наличие IgE, специфичных к минорным (не охарактеризованным) компонентам аллергена.
Микроэррей (microarrey) является сравнительно новым (разработан
в 1990-х гг.) и весьма перспективным направлением в прикладной молекулярной биологии. В настоящее время наибольшее распространение
получила технология микроэррея, основанная на ДНК-олигонуклеотидах, однако развивается и микроэррей с применением моноклональных антител и рекомбинантных антигенов. В частности, подобная технология
применяется для диагностики и оптимизации лечения аллергий (рис. 9).
Рис. 9. Схема проведения микроэррея для диагностики аллергии
Исследование проводится в несколько этапов:
1. Приготовление микрочипа: рекомбинантные аллергены раскапываются на поверхность активированного предметного стекла (объем
капли — нанолитры, количество антигена — десятки пикограмм). Одно стекло содержит 12 ячеек. Каждая ячейка содержит десятки (сотни) различных аллергенов и калибровочную кривую (возрастающие количества IgE) в триплетах. Таким образом, одновременно можно обследовать до
12 пациентов.
2–3. Ход теста:
а) раскапывание сывороток пациентов (15 мкл);
б) инкубация (IgE пациента соединяются с аллергенами);
в) добавление моноклональных антител против IgE, меченных флуорохромом;
г) сканирование микрочипа;
д) типичная сканограмма микрочипа:
– первые три ряда = калибровочная кривая (интенсивность свечения пропорциональна количеству фиксированных IgE);
– далее — профиль сенсибилизации пациента (специфичность и количество IgE в сыворотке пациента).