ОЦЕНКА РЕЗИСТЕНТНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИМИКРОБНЫМ ХИМИОПРЕПАРАТАМ
Автоматизированные системы
Наличие аппаратного обеспечения позволяет с помощью программы BACT в автоматизированном режиме определить антибиотикочувствительность выделенных штаммов двумя методами:
1). С количественной регистрацией результатов – определение минимальной ингибирующей концентрацией (МИК);
2). Полуколичественной регистрацией результатов – ТПК (тест пограничных концентраций).
Использование автоматизированной системы позволяют получать результаты антибиотикочувствительности через 6 часов от момента выделения чистой культуры, заменить малопроизводительный ручной труд.
В целях снижения расходов дорогостоящих антибактериальных препаратов и исключения бесконтрольного применения антибиотиков рационально использовать анализаторы определения резистентности микроорганизмов к антибактериальным препаратам –“OSIRIS” ( “Sanofi Pasteue”,Франция), “Phoenix 100 System” (“Becton Dickinson”, США), “WaikAway 40(96)” (“DADE Intern.,I nc.”,США), “Bioscreen/iEMSreader” (“Labsystem”, Финляндия). Программное обеспечение позволяет выбирать препарат с учетом доз, путей введения и фармакокинетики.
Ручные системы
Качественная оценка антибиотикорезистентности микроорганизмов требует тщательной стандартизации всех этапов исследования и наличия качественных питательных сред [Скала Л.З., с соавт., 1997; Туркутюков В.Б., 1999, 2000]. К сожалению, на сегодняшний день бактериологические лаборатории лечебно - профилактических учреждений сталкиваются со значительными методическими и материальными трудностями при постановке диско - диффузионного метода и метода серийных разведений. В связи с этим, получаемые результаты по оценке чувствительности к антибиотикам штаммов, выделенных из клинического материала, не соответствуют стандартам качества, а значит, не дадут эффекта при их применении у данного пациента [Скала Л.З., с соавт., 1997; Туркутюков В.Б., 1999, 2000]. Оптимальным решением для повышения эффективности и качества антимикробной химиотерапии является внедрение стандартизованных методов для ее назначения и оценки.
Тест-системы
Одним из удобных и достаточно экономичных способов оценки резистентности микроорганизмов к антибиотикам является использование готовых тест-систем, использующих принцип метода серийных разведений в варианте пограничных концентраций (тест пограничных концентраций – ТПК). Их применение избавляет практических бактериологов от проведения наиболее трудоемких подготовительных этапов исследования (приготовление и стандартизация питательных сред, реактивов, оценка качества проведенных исследований и т.д.), а самое главное – получать стандартизованные и качественные результаты. Выпускаемые в настоящее время тест-системы разработаны на основе стандартных 96-луночных планшетов для иммунологических исследований, что позволяет проводить как визуальный учет результатов, так и автоматизированный с использованием различных спектрофотометров. ТПК-тест – это микротест одноразового использования, позволяющий определить чувствительность 4-х исследуемых штаммов микроорганизмов одновременного к 12 антибиотикам. Каждый антибиотик представлен двумя пограничными концентрациями, позволяющими дифференцировать микроорганизмы по степени чувствительности на три категории – «чувствительные», "умеренно-резистентные» и «резистентные». Большая концентрация соответствует минимальному значению МПК (минимальная подавляющая рост микроорганизма концентрация) для устойчивых штаммов. Малая концентрация соответствует максимальному значению МПК для чувствительных штаммов. Таким образом, при использовании таких тест-систем оценивается не только чувствительность данного штамма к конкретному антибиотику, но и определяется МПК.
Внедрение в работу микробиологических лабораторий коммерческих тест-систем позволит стандартизовать определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и, использовать полученные данные для подбора наиболее эффективного антибиотика, а так же дозы и кратности его введения пациенту.
Примеры тест-систем: ATB ANA (анаэробы), ATB BLSE, ATB FUNGUS (грибы), ATB G-5 (грамотрицательные палочки), ATB NH (нейссерии и гемофилы), ATB PSE 5 (псевдомонады), ATB STAPH 5 (стафилококки), ATB STREP 5 (стрептококки),ATB UR 5 (мочепатогены) (“bioMerieus”, Франция ) и другие.
Е-тесты
Е-тесты (приложение) позволяют оценить резистентность микроорганизмов к антибиотику, совмещая два метода диско-диффузионный и метод серийных разведений. Постановка проводится на чашке Петри с агаром Мюллер-Хинтон, на который, после посева исследуемого штамма микроорганизма, накладывается Е-тест, представляющий собой полоску содержащую различные концентрации антибиотика. Учет проводится по наличию наибольшей зоны ингибиции роста исследуемого штамма, концентрация антибиотика в этом участке теста - МПК. В настоящее время Е-тесты в РФ не зарегистирированы.
Определение b-лактамазной активности
Для оценки бетта-лактамазной активности микроорганизмов используют диски, пропитанные нитроцефином (цефалоспорин, изменяющий окраску диска при гидролизе. Положительный результат указывает на то, что данный штамм микроорганизма не чувствителен ко всем бетта-лактамным антибиотикам (пенициллины, не защищенные от бетта-лактамаз; цефалоспорины).
В настоящее время появились экспресс-тесты по выявлению бетта-лактамазной активности, позволяющие в течение 1- 4 часов дать ответ о возможности использования бетта-лактамных антибиотиков у конкретного больного.
Пример реагента: бета-ЛАКТАМтест (стриппированный) – ускоренное обнаружение бетта-лактамазной активности у стафилококков, нейссерий, гемофилов.