Здоровье человека

Лечение, диагностика и профилактика

  • Full Screen
  • Wide Screen
  • Narrow Screen
  • Increase font size
  • Default font size
  • Decrease font size

Госпитальные инфекции. Часть 1 - Биохимическая идентификация

E-mail Print PDF

Биохимическая идентификация

Идентификация выделенного штамма микроорганизма является наиболее трудоёмким и материально затратным исследованием, так же зависящим от целого комплекса предварительных манипуляций: точности приготовление сред, растворов, реактивов, навесок необходимых ингредиентов, качества дистиллированной воды, строгого соблюдения рН и температуры при приготовлении необходимого набора реагентов для идентификации, а также при дальнейшем их хранении и использовании. Все это обусловливает необходимость стандартизации ингредиентов исследования, контроля их качества.

Одним из наиболее часто применяемых в мировой практике в настоящее время способов быстрой идентификации различных бактерий, позволяющих стандартно и качественно проводить данный вид исследования, является использование высушенных питательных сред с субстратами, помещенными в лунки пластмассовых пластин для микротитрования. В них, в ходе инкубации испытуемого штамма, протекают биохимические реакции, результаты которой регистрируются визуально по изменению цвета индикатора. В большинстве тест-систем идентификации микроорганизмов время инкубации, в зависимости от вида набора, составляет 4 - 48 часов.

Автоматизированный метод

В приказе Министерства здравоохранения РФ № 380 от 25 декабря 1997 года большое внимание уделяется развитию микробиологических лабораторий. В Примерном перечне приборов, оборудования и медицинского инструментария (приложение № 8 к приказу № 380, а также согласно приказу № 8 от 1995 года) значатся: «Автоматическая и полуавтоматическая системы для микробиологических исследований (идентификация видов бактерий и определения их чувствительности к антибиотикам) в комплексе с тест системами», «Полуавтоматический программируемый фотометр для считывания оптической плотности в 96-луночных планшетах».

Для автоматизированных микробиологических исследований ряд фирм предлагают различные комплексы на базе специализированного планшетного фотометра и пакета компьютерных программ.

Важным направлением применения автоматизированных систем микробиологи является диагностика микобактерий. Культуральная диагностика туберкулеза в настоящее время переживает принципиальные изменения, связанные с внедрением в практику систем культивирования микобактерий на жидких средах – это “BACTEC MGIT 960” (“Becton Dickinson”,США) u MB/BacT (“Organon TekniKa”, Голландия). В результате внедрения этих систем среднее время детекции роста микроорганизмов значительно короче (10,7 дня для “BACTEC MGIT 960” и 18,7 дня на MB/BacT, против 33,2 дня на стандартной плотной среде Левенштейна-Йенсена) [Литвинов В.И., Мороз А.М., 2000].

На рынке микробиологической аппаратуры, для автоматизации процесса идентификации микроорганизмов, в РФ предлагаются ATB-Expression, фирма “bioMerieux”, Франция: Sceptor, фирма “Dina Handel”, Германия, “Bioscreen/iEMS-reader, фирма “Labsystems”, Финляндия: Walk-Away-40(96), фирма “Dade AG” и Cobas Micro , фирма “Becton Dickinson”, США и др.

Пример: автоматизированный комплекс для проведения микробиологических исследований с наиболее приемлемой стоимостью, а также возможностью его использования и как иммуноферментного анализатора (ИФА).

АО «Аналитика» на базе аппаратного обеспечения фирмы «Лабсистемс» (Финляндия)- Bioscreen/iEMS-reader и пакета компьютерных программ отечественного производства (в отличие от других производителей) создало автоматизированное рабочее место врача-бактериолога и химиотерапевта.

Программное обеспечение «БАКТ» предназначено для автоматизации процесса считывания результатов реакции в планшетных тест-системах (96 ячеек), обработки первичных данных по идентификации и определению степени чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и проведения кинетических измерений с построением кривых их роста. Комплекс сформирован на базе специализированного 8-ми канального планшетного фотометра со встроенным термостатом, система контроля которого позволяет с точностью ±0,20С поддерживать необходимый температурный режим инкубирования планшета; прибор имеет встроенный орбитальный шейкер, колесо с набором из восьми светофильтров – 340, 405, 414, 450, 540, 620, и 690 нм; оптическая система позволяет проводить измерения в диапазоне от 0 до 4 единиц ОП; управление работой прибора осуществляется при помощи внешнего компьютера и программ «БАКТ» и «ИФА».

«БАКТ» позволяет:

Работать с широким спектром тест-систем для идентификации бактерий различных групп; могут быть использованы как отечественные (НПО «Аллерген», Ставрополь), так и импортные (АОЛ «Лахема», Чехия) тест-системы;

Провести идентификацию более 330 видов микроорганизмов;

- более 80 видов и групп из семейства энтеробактерий и вибрионов;

- 40 видов неферментирующих грамотрицательных бактерий;

- более 80 видов оксидазо (-)микроорганизмов;

- более 50 видов оксидазо (+)микроорганизмов;

- 35 видов стафилококков и микрококков;

- 49 видов стрептококков, энтерококков и аэрококков;

- 12 видов нейссерий;

- 10 видов коринебактерий;

- более 90 видов анаэробов.

Проводить исследования по определению степени чувствительности к антибиотикам выделенных штаммов микроорганизмов, с использованием отечественных микропланшетных тест-систем, разработанных в ГНЦ по антибиотикам МЗ РФ для определения минимальных ингибирующих концентраций (МИК-тест) и для полуколичественных исследований (ТПК-тест);

В режиме кинетического измерения:

- проводить учет степени бактериурии, обсемененности различных биосубстратов;

- получать «кривые роста» микроорганизмов, свидетельствующие о кинетике их размножения как под действием различных факторов, так и интактных;

- моделировать септический и местный гнойно-воспалительные процессы с подбором индивидуальной антибактериальной терапии;

- определять степень подавления механизмов антиинфекционной резистентности;

- проводить оценку бактерицидности сыворотки крови больного для выявления интенсивности подавления противоинфекционных механизмов защиты;

- получать калибровочные зависимости и производить расчет основных фармакокинетических параметров;

- проводить фармакокинетические исследования по определению концентраций антибактериальных препаратов, витаминов, аминокислот и т.п. в биологических жидкостях;

- проводить скрининг препаратов (или их комбинаций) для выявления их антибактериальной чувствительности;

- изучать влияние различных комбинаций антибактериальных препаратов на чистую или смешанную культуру микроорганизмов

- Оценивать качество питательных сред по степени накопления микробной массы;

- Через 5-6 часов выявлять пробы с исходной обсеменённостью более 105 КОЕ/см2, а через 16-18 часов получить точное количество микробных те в см2 мочи и других биосубстратах;

- Проводить статистический анализ деятельности микробиологической лаборатории;

- Проводить эпидемиологический анализ:

- Отслеживать динамику смены чувствительности отдельных микроорганизмов и их ассоциаций к применяемым антибактеральным препаратам при определенных нозоформах, в отделении, в больнице;

- Получать сведения о количестве выделенных возбудителей гнойно-септических заболеваний;

- Получать полную сводку статистических и эпидемиологических данных по стационару в целом и по отдельным его подразделениям за любой отчетный период времени;

- Определять ведущую микрофлору по отделениям, биоматериалам и локализациям (диагнозам);

- Определять наиболее эффективные антибиотики в отношении ведущей микрофлоры и по каждому интересующему возбудителю;

- Обеспечить наиболее эффективный подбор антибактериальных средств для каждого конкретного больного;

- Выявлять наличие госпитальных инфекций;

- Выявлять формирование и циркуляцию госпитальных штаммов микроорганизмов.

q Наличие компьютерной версии «Журнала микробиолога».

ПРИМЕНЕНИЕ автоматизированной системы микробиологических исследований позволяет сократить, не менее чем в два-три раза, расходы на лечение больных за счет:

Ø значительного повышения качества лечения,

Ø сокращения сроков госпитализации,

Ø обоснованного планирования закупок наиболее эффективных для конкретного региона антибактериальных препаратов.

Ручной метод

Коммерческие микрообъёмные тест-системы по устройству представлены двумя группами: содержащими субстрат реакции в питательной среде или шаблоне - носителе. Результаты биохимических тестов учитываются визуально, вид микроорганизма устанавливается с помощью таблицы идентификации, кодов (профилей) или компьютерных программ.

Среди тест-систем, основанных на принципе «субстрат в питательной среде» используются: API 20E “Bio Merieux” (Франция); Enterotest 1 u Enterotest 2, Enterotest 16, Enterotest 16, Entero-Screen и другие (АО “Lachema”, Чехия); мультимикротесты MMTE 1 u MMTE 2 (НПО «Аллерген», Ставрополь); ПБДЭ (НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород); тест-система «РАПИД-ЭНТЕРО 200М» (НИИЭМ имени Пастера, Санкт-Петербург).

К системам типа «субстрат на шаблоне носителя» относятся коммерческие тест-системы Micro-ID, Minitek, в которых субстрат и индикатор находятся на бумажных дисках, которые вносят в лунки планшетов с суспензией бактерий. Имеются дополнительно идентификационные полоски Микро-Ла-Тест: ОКСИ тест – для выявления цитохромоксидазы, ОНП-тест на бета-галактозидазу, КОЛИ-тест – на b-D-глюкуронидазу, ВП-тест – на ацетоин и другие.

В 2001 году на рынке микробиологических реагентов появилась тест-система «РАПИД-ЭНТЕРО 200-М» (НИИЭМ имени Пастера, ОНТ, Санкт-Петербург), предназначенная для быстрой (5 часов) биохимической идентификации наиболее часто встречающихся в медицинской практике видов энтеробактерий – возбудителей гнойно-септических и острых кишечных инфекций. Рассчитанная на исследование 200 культур бактерий. Тест-система обеспечивает постановку 18 тестов: экспрессное определение цитохромоксидазы, феномена «тяжа» грамотрицательных бактерий, ферментацию глюкозы (1 час); выявление уреазы, триптофандезаминазы, индола, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, ацетоина, сероводорода, нитратредуктазы; ферментации лактозы, эскулина, маннитола, маннозы, мальтозы, арабинозы, адонитола. Исследованию подлежат чистые культуры, выросшие из отсевов колоний со сред выделения на секторах питательного агара (или питательного агара с желчью). Предварительно проводится их групповая идентификация и определяется возможная принадлежность к семейству энтеробактерий экспресс-тестами: на цитохромоксидазу, тестом «тяжа» на грамотрицательные бактерии, ферментацию глюкозы микрообъёмным методом (учет через 1 час). Дальнейшему исследованию подлежат грамотрицательные, оксидазонегативные, ферментирующие глюкозу бактерии. Специфичность идентификации энтеробактерий составляет 97,6%. Диагностическая значимость: идентификация 96% изолятов энтеробактерий. Она наиболее экономична, обеспечивает большой объем исследований, проста и надежна в использовании. Стоимость одного исследования существенно дешевле, чем всеми другими тест-системами. НПО НИИЭИ имени Пастера предлагает широкий спектр реактивов для ускоренной (1-6 часов) микрообъемной биохимической идентификации микроорганизмов: определение уреазы; триптофанандезаминазы; индола; лизиндекарбоксилазы; аргининдигидролазы; орнитиндекарбоксилазы; ацетоина; глюкозы; ферментации углеводов и спиртов (лактоза, маннит, сорбит, адонит); ферментации углеводов и спиртов (сахароза, манноза, арабиноза, глюкоза); сероводорода; нитратредуктазы; цитрата натрия; ацетата натрия

You are here: