Организация и проведение микробиологических исследований
На современном этапе диагностического процесса для микробиологической лаборатории весьма актуальной является проблема качественного выделения чистой культуры (контролю качества проведения исследования должно уделяться пристальное внимание). Этот важный этап анализа, от которого зависит результат идентификации микроорганизма, определения его свойств (в том числе резистентности к антибиотикам) и назначения адекватного лечения пациенту.
Получение чистой культуры
Начальным этапом бактериологического исследования является выделение из исследуемого материала, полученного с соблюдением правил забора с учетом патогенетического характера и течения инфекционного процесса, изолированной колонии и накопление чистой культуры. Это очень важно, так как неправильный подбор питательных сред и условий культивирования делает не возможным выделение этиологически значимых возбудителей данной инфекционной патологии. Поэтому, при подготовке к посеву клинического материала, врач бактериолог должен отчетливо представлять, что он должен искать, в этом неоценимую помощь ему должен оказать врач клиницист, направивший данный материал на исследование.
Для эффективного и качественного бактериологического исследования необходимо правильно сделать подбор питательных сред для последующего исследования. Питательные среды должны отвечать поставленной цели, т.е. соответствовать трофическим потребностям выделяемых микроорганизмов, обеспечивать их рост в наиболее короткие сроки. А также давать возможность первичной идентификации от сопутствующей микрофлоры при ее возможном наличии (кроме забора материала из первоначально стерильных полостей, органов и тканей, например: брюшная и грудная полости; кровь, спиномозговая жидкость; биоптаты из органов и тканей). Вторым компонентом успешной работы, является выбор условий культивирования: температуры (например: микоплазмы рационально культивировать при температуре 350С), содержания или отсутствия кислорода (например: нейссерии и стрептококки требуют 10% СО2 в атмосфере; кампилобактерии – минимальное содержание кислорода; клостридии и бациллы – полное отсутствие кислорода и т.д.); времени инкубации (например: микобактерии культивируют не менее 3-4 недель, а энтеробактерии – 18-20 часов и т.п.).
Одним из направлений оптимизации и повышения эффективности и качества бактериологических исследований на первом этапе исследования, накопление и выделение этиологически значимых микроорганизмов, является применение высоко селективных сред для их выделения.
Получение изолированных колоний
Для получения изолированных колоний необходимо использовать селективные среды, создающие режим наибольшего благоприятствования для данного микроорганизма или группы микроорганизмов.
На данном этапе исследования возможно не только получение колоний микроорганизмов, но и одномоментная их идентификация. Такие питательные среды называются хромогенными.
Фирма “Sanofi Pasteur”(Франция) предлагает, например, следующие хромогенные среды: среду - Rapid’E.coli, предназначенную для прямой идентификации и подсчета E.coli и колиформ в продуктах питания и объектах окружающей среды (колонии колиформных микроорганизмов окрашиваются в голубой цвет, а кишечная палочка в розовый, разной интенсивности); среду - Rapid L.mono, предназначенную для обнаружения листерий (L.monocytogenes - колонии голубого цвета, L.ivanivii – зеленые колонии, Listeria spp.- белые колонии); среду - URISELECT3, для изоляции и количественного определения микроорганизмов в мочевом тракте (E.coli, Proteus spp., Streptococcus gr.D); среду - CANDISELECT, для выделения и прямой идентификации грибов рода Candida (колонии C.albicans - голубые, колонии C.tropicalis, C.krusei и C.glabrata- белые).
Отдел новых технологий НИИЭМ имени Пастера предлагает селективные среды для выделения и одновременной идентификации микроорганизмов: среда «Клебсиелла 5-АСК», предназначена для одноэтапного выделения в течение 20-24 часов и одновременной идентификации бактерий рода Klebsiella (видов K.pneumoniae, K.oxytoca, K.mobilis); среда «ПРОТЕУС ППМ», предназначена для одноэтапного выделения в течение 18-24 часов и одновременной идентификации бактерий группы родов Proteus, Providencia, Morganella; среда «ПСЕВДОМОНАС АПС», предназначена для одноэтапного выделения в течение 18-24 часов и одновременной идентификации Pseudomonas aeruginosa при температуре 420С и Pseudomonas putida при 370С; среда «УРЕАПЛАЗМА-96(или 102)», предназначена для одноэтапного выделения и одновременной идентификации Ureaplasma urealiticum в течение 24-48 часов; среда «МИКОПЛАЗМА-96(или 102, 120)» -– предназначена для одноэтапного выделения Mycoplasma hominis в течение 18-24 часов и одновременной идентификации.