Метод Красильникова, Горячева, Золотухина
Метод Красильникова. Сущность его заключается в том,что яица гельминтов в фекалиях под действием детергентов в период отстаивания взвеси концентрируются в осадке.
Рабочий раствор моющего средства (детергента) готовится из стирального порошка, предварительно высушенного в сушильном шкафу при 100о С в течение 1-2 ч. Для приготовления раствора каждый раз подбирается такая максимальная навеска порошка, которая растворяется без осадка. Порция фекалий величиной с лесной орех помещается в фарфоровый или стеклянный стаканчик, в который при тщательном размешивании постепенно доливается 20-30 г раствора детергента.Взвесь оставляется на 1 сутки или центрифугируется в течение 1-2 мин при 1000-1500 об/мин. На дне сосуда образуется трехслойный осадок. Нижний слой содержит тяжелые частицы, средний - более легкие и яйца гельминтов, верхний - наиболее легкие хлопья. Пастеровской пипеткой 1-3 капли содержимого среднего слоя переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом или целлофановой пленкой и микроскопируют. На одном предметном стекле готовят два препарата.
Метод Горячева. Применяется обычно для выявления тяжелых яиц трематод, которые не всплывают при исследовании кала по методу Фюллеборна. При этом обнаруживаются яйца и других гельминтов. В цилиндр диаметром 1,5-3 см и высотой 20 см наливают 100 мл насыщенного раствора хлористого натрия (или 22% раствора азотнокислого калия). Комочек кала (0,5- 1,0 г) тщательно размешивают в 20-25 мл воды и медленно фильтруют через воронку с двумя слоями марли, наслаивая фильтрат сверху на солевой раствор и избегая перемешивания. Образуются два разграниченных слоя. По мере отстаивания яйца с небольшим количеством частичек кала оседают на дно цилиндра. Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют еще на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок забирают пипеткой и исследуют под микроскопом.
В.А. Золотухин для массовых обследований предложил проводить отстаивание в центрифужных пробирках, используя небольшие объемы жидкостей. Суспензия кала готовится в 3-4 мл воды, а солевой раствор наливается в центрифужные пробирки в количестве 3-5 мл. В остальном исследование проводится как обычно.
Крупные яйца печеночной двуустки и шистосом в значительном количестве задерживаются на марлевых фильтрах, поэтому для их выявления используют мелкие металлические сетки или мелкоячеистый мельничный газ.
Метод повторного отстаивания. Проба фекалий массой 20-30 г смешивается с 250 мл воды, процеживается через очень мелкую сетку (чулочный трикотаж, мельничный газ) в цилиндр или конический сосуд и отстаивается в течение 30 мин. Затем надосадочная жидкость сливается; до первоначального объема добавляется чистая вода, сосуд встряхивается и смесь снова отстаивается. Процедура повторяется до тех пор, пока верхний слой жидкости не станет прозрачным. После этого из осадка делаются мазки на предметных стеклах и микроскопируются.Метод применяется преимущественно для выявления яиц трематод.
Исследование дуоденального содержимого. В желчи и дуоденальном содержимом могут быть обнаружены яйца гельминтов, находящихся в печени, поджелудочной железе или двенадцатиперстной кишке: яйца различных двуусток, анкилостомид, кишечной угрицы, а также яйца аскарид при извращенной локализации этих паразитов в печени.
Полученный при зондировании субстрат после внешнего осмотра центрифугируется, осадок переносится на предметное стекло и микроскопируется. Если в надосадочной жидкости обнаруживаются хлопья, в которых могут содержаться яйца гельминтов, то исследуется не только осадок, но и эти хлопья. При наличии больших количеств слизи и гноя субстрат перед центрифугированием смешивается с равным объемом эфира.
Исследование мокроты. В мокроте могут быть обнаружены яйца легочной двуустки; очень редко встречаются личинки аскарид, анкилостомид и элементы эхинококкового пузыря (крючья, обрывки оболочки кисты, выводковые капсулы со сколексами). Для их выявления исследуются нативные мазки. В ряде случаев гнойная мокрота смешивается при этом с О,5% раствором едкого натра или с 25% антиформином. Смесь на 1-1,5 ч помещают в термостат, затем центрифугируют и микроскопируют осадок.
Яйца глистов характеризуются следующими особенностями независимо от вида паразита: а) определенным размером;
б) специфической формой;
в) различной структурой оболочки;
г) своеобразной внутренней организацией (эмбриональные крючья, различное число бластомеров, наличие желточных клеток, филаметов и пр.). Указанные признаки позволяют распознать яйца паразитических червей и отличить их от похожих образований, могущих ввести наблюдателя в заблуждение. Неопытный исследователь иногда принимает за яйца червей сильно преломляющие свет пузырьки воздуха, круглые, блестящие капельки жира, плоские и овальные растительные клетки, споры, зерна детрита, кольца растительных сосудов и пр. Структура подобных образований бывает однородной, оболочка или отсутствует, или никогда не бывает сложного строения. Полезно легким движением покровного стекла изменить положение наблюдаемого объекта, что дает возможность составить о нем более полное представление. Следует отметить, что в испражнениях иногда можно обнаружить яйца клещей (мучных, сырных);
белые яйца этих клещей (0,12х0,08 мм) эллиптической формы с широкоовальными полюсами, тонкая оболочка их легко дает складки, содержимое однородно; на поздних стадиях развития яйца имеют личинку. В сомнительных случаях прибегают к измерению подозрительных объектов.
Для сохранения фекалий с яйцами глистов их тщательно смешивают в равном объеме с горячим 10% раствором формалина, или прибавляют его к фекалиям после получасового нагревания их в водяной бане при 60°; высокая температура исключает возможность в дальнейшем развития яиц нематод до стадии личинки.