МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОРМОНОВ
За последние несколько лет в результате разработки более тонких, чувствительных и специфических методов определения гормонов клиническая эндокринология во многом превратилась из своего рода искусства в раздел прикладной биохимии, физиологии и фармакологии. Этот прогресс оказался возможным благодаря выделению и последующей биологической и биохимической характеристике различных высокоочищенных полипептидных гормонов, стероидов, витаминов, производных небольших полипептидов и аминокислот, которые относят к гормонам, а также получению меченных радиоактивными атомами гормонов с высокой удельной активностью. Многие эндокринные заболевания распознаются или по крайней мере предполагаются на основании присутствия слишком большого или слишком малого количества нормально секретируемого гормона. Возможность определения низкого уровня гормонов в биологических жидкостях оказала существенную помощь в упрощении диагностических исследований.
Для количественного определения гормонов в тканях и жидких средах организма вначале применялись относительно грубые и громоздкие биологические методы. С разработкой более чувствительных радиоиммунологических и радиорецепторных методик появилась возможность использовать более быстрые и экономичные способы определения гормонов, которые по существу стали краеугольным камнем клинической эндокринологии. Несмотря на свои недостатки, классические биологические методы сохранили значение для полной характеристики гормона, особенно в условиях возможного расхождения его биологических и иммунологических свойств. К счастью, уровень гормонов, определяемый радиоиммунологическим и биологическим методами коррелируют друг с другом. В связи с этим концентрация гормонов, определяемая с помощью радиоиммунологического метода, обычно свидетельствует об уровне биологически активных гормонов в крови. Эта связь достаточно случайна, поскольку биологическая и иммунологическая активность, как правило, отражает разные свойства, и присуща она разным участкам молекулы гормона.
Получение высокоочищенных гормональных препаратов не просто дало возможность разработать чувствительные методы измерения концентрации гормонов, но и снабдило исследователей неоценимым средством углубленного проникновения в механизмы их клеточного действия. С помощью этих средств выяснилось, что клинические расстройства могут обусловливаться нарушением не только секреции, но и действия гормонов в силу качественных или количественных изменений рецепторов отдельных гормонов, равно как и внутриклеточных биохимических механизмов опосредования гормонального эффекта. В настоящей главе описаны общие принципы надежности методов биологического, радиоиммунологического и радиорецепторного определения гормонов и общие требования, предъявляемые к этим методам. В большинстве случаев исследования весьма сложны, требуют тонкой аппаратуры и опыта экспериментатора. Кроме того, проведение таких исследований требует времени, причем разного при определении разных гормонов, так что получение «моментальных» результатов редко возможно. Ничто не может привести заведующего лабораторией в большее уныние, чем требование определить уровень паратгормона в сыворотке за 10 мин после отправки пробы в лабораторию. Время, необходимое для проведения анализа, варьирует от нескольких часов до нескольких дней в зависимости от метода определения и определяемого гормона.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Результаты анализа гормонов, выполняемого в различных лабораториях, должны выражаться в общепринятых стандартных единицах. Результаты биологических исследований приводятся обычно в системе единиц международного стандарта, получаемого из ВОЗ. Эти результаты могут быть выражены и в единицах препарата сравнения, получаемого лабораториями из центров, обслуживающих более ограниченные географические области. В таком случае результаты анализа следует сопровождать указанием на способ пересчета единиц препаратов сравнения в единицы международных стандартов. Хотя полипептидные гормоны и являются высокоочищенными, но в соответствующих препаратах присутствуют небольшие, но влияющие на результаты анализа примеси; поэтому обычно избегают приводить результаты биологических и иных определений в единицах массы гормона. Количество большинства полипептидных гормонов, определяемое с помощью биологических или радиоиммунологических методов, оценивают в системе единиц, ранее установленных ВОЗ. С другой стороны, поскольку стероидные и тиреоидные гормоны существуют в химически чистом виде, результаты их определения обычно выражают в единицах массы. Поскольку в разных лабораториях используют несколько (хотя и существенно) различающиеся реактивы и методики, каждая лаборатория должна определять пределы нормальных колебаний концентрации гормонов в пробах, отбираемых в стандартных условиях и анализируемых с помощью тщательно охарактеризованных реактивов или моделей биологического исследования.