ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Ферментативная иммунохроматография
Ферментативная иммунохроматография потенциально может широко применяться в кабинете врача. Этот метод предназначен для выявления веществ, которые в настоящее время определяют в основном с помощью конкурентных методов иммуноанализа.
В ферментативной иммунохроматографии (ФМХ) используется коньюгат фермента с определяемым веществом и специфические антитела против него. Принцип метода ФМХ следующий: определенный объем пробы смешивают с раствором, содержащим коньюгат фермент-гаптен и соответствующий ферментный реагент. Определяемое вещество и коньюгат определяемого вещества с ферментом конкурируют друг с другом за центры связывания на полоске фильтровальной бумаги. Высота окрашенной зоны, образуемой в результате реакции коньюгата с субстратом, прямо пропорциональна концентрации определяемого вещества в пробе. В настоящее время носители реагентов разнообразны (приложение 3). Время получения результата от 5 до 30 минут, в зависимости от вида тест-системы, с визуальным качественным и/или полуколичественным определением.
Примеры наборов иммунохроматографии на бумаге (фирмы – HUMAN Германия; VEDA.LAB Франция, TRINITY Ирландия): STREP-A-CHECK-1 - специфическая диагностика стрептококковой инфекции группы А; STREP-B-CHECK-1 - специфическая диагностика стрептококковой инфекции группы В; RSV-CHECK-1-определение этиологии (респираторно-синцитиальный вирус) пневмонии и бронхиолитов у детей первого года жизни и младшего возраста; ROTA-CHECK-1-определение этиологии гастроэнтеритов (ротавирусы) у детей первого года жизни и младшего возраста; ADENO-CHECK-1-определение этиологии гастроэнтеритов (аденовирусы) у детей первого года жизни и младшего возраста; CHLAMY-CHECK-1-специфическая диагностика хламидиоза, контроль за проводимой химиотерапией; H.PYLORI-CHECK-1-специфическая диагностика инфицирования Helicobacter pylori ; SYPH-CHECK-1-скрининговый тест для диагностики сифилиса; TB-CHECK-1-скрининговый тест для диагностики туберкулеза; TOXIN.A-CHECK-1-определение этиологии (токсин А Clostridium difficile) диареи у детей младшего возраста; Uni-Gold HIV-специфическая первичная диагностика ВИЧ-инфекции и вирусоносительства, подготовка к оперативным вмешательствам и экстракорпоральным методам; HEXAGON HBsAg-специфическая первичная диагностика вирусного гепатита В и вирусоносительства, подготовка к оперативным вмешательствам и экстракорпоральным методам
Примеры наборов на иммунохроматографической мембране(фирмы – HUMAN Германия; TRINITY Ирландия) :SeroCard HCV специфическая первичная диагностика вирусного гепатита С и вирусоносительства, подготовка к оперативным вмешательствам и экстракорпоральным методам;SeroCard HIV-специфическая диагностика ВИЧ-инфекции и вирусоносительства, подготовка к оперативным вмешательствам и экстракорпоральным методам; HEXAGON HIV(1+2 ТИП) - специфическая диагностика ВИЧ-инфекции и вирусоносительства, подготовка к оперативным вмешательствам и экстракорпоральным методам.
Все наборы рассчитаны на визуальный учет результатов, не требуют дополнительного оборудования и реактивов, однако учет и интерпретация результатов проводится только квалифицированным персоналом.
Газожидкостная хроматография (ГЖХ)
Газожидкостная хроматография в этиологической диагностике инфекций имеет две области практического применения. Наиболее распространено использование ее для идентификации анаэробных возбудителей на конечном этапе микробиологического анализа. Реже - выявление анаэробов в клиническом материале.
Для решения обеих задач могут использоваться две принципиально отличные методики хроматографического анализа.
І-я методика: извлечение определяемых характерных веществ из анализируемого объекта летучим растворителем с последующим вводом экстракта в хроматограф.
ІІ- методика: парафазного (head-spase) анализа. При данном анализе в хроматограф вводится не экстракт из анализируемого объекта и не сам объект, а находящаяся над ним и насыщенная летучими веществами паровая фаза. Обнаружение анаэробов в клиническом материале, как и идентификация чистых культур в микробиологических исследованиях. Основано на обнаружении специфических продуктов их метаболизма – летучих жирных кислот – пропионовой и нормальной и изомерной масляных, валериановой, капроновой, являющихся таксономическими признаками анаэробов. Материал, чаще экссудаты, из очага инфекции в количестве 1 мл помещают в стандартный пенициллиновый флакон, добавляют к нему равное по массе количество кристаллического калия бисульфата и закрывают пенициллиновой пробкой. В специальном патроне этот флакон нагревают в течение 5…10 мин до 900С и затем присоединяют к блоку ввода пробы в хроматограф. Специальным дозатором паровая фаза над образцом вводится из флакона в хроматографическую колонку например отечественного хроматографа «Цвет-102» с ионизационно-пламенным детектором. Достоверность газохроматогрофического определения анаэробов при различных гнойно-септических процессах составляла 96% [Колесов А.П., Столбовой А.В., Кочеровец В.И., 1989].
С целью экспресс-диагностики генерализованных хирургических инфекций проводится определение летучих жирных кислот (ЛЖК) и глиоксиловой кислоты в биологических средах (кровь, ткани, отделяемое ран, пунктаты и т.д.). Соотношение и виды ЛЖК позволяют дифференцировать аэробную микрофлору от анаэробной, устанавливать вид микроорганизма. Продолжительность исследования составляет 1-1,5 часа [Карпищенко А.И., Элькин Г.И., 2000]. Широкое применение нашла автоматическая хемоиндикация на основе газожидкостного анализа жирных кислот бактерий и грибов (MIS Sherlock/GC 6890 HP, MIDI Inc.,США), позволяющая выявлять более чем 100 аэробных и анаэробных микроорганизмов.